تاثیر bacillus thuringiensis var kurstaki بر فعالیت آنزیم های گوارشی و فنل اکسیداز لارو پروانه ابریشم باف پاییزی hyphantria cunea (drury) (lepidoptera: arctiidae)

پروانه سفید اشجار hyphantria cunea drury یکی از آفات مهم درختان جنگلی، میوه و زینتی در استان گیلان می باشد. آنزیم های گوارشی نقش مهمی در تغذیه حشرات دارند. لاروهای پروانه سفید اشجار از روی درختان چنار در استان گیلان جمع آوری شدند. لوله گوارش و غدد بزاقی لاروها جدا شده و برای انجام آزمایش ها در دمای 20- نگهداری شدند. همچنین همولنف با قطع یکی از پا های کاذب لاروها جمع آوری و در آزمایش مورد استفاده قرار گرفت. اثر ph (4-12)، دما (c°15-75) و مواد شیمیایی روی فعالیت آنزیمهای گوارشی موجود در لوله گوارش، غدد بزاقی و همولنف پروانه سفید اشجار با استفاده از بافرسیترات-فسفات- گلایسین40 میلی مولار مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که phبهینه آلفا-آمیلاز موجود در غدد بزاقی و لوله گوارش 10 بوده و دمای بهینه برای فعالیت این آنزیم در لوله گوارش و غدد بزاقی به ترتیب 55 و 45 درجه سانتی گراد محاسبه شد.ph بهینه برای آلفا-گلوکوزیداز موجود در لوله گوارش و همولنف به ترتیب 8، 7 و برای بتا-گلوکوزیداز لوله گوارش، غدد بزاقی و همولنف به ترتیب 8، 6 و 8 بدست آمد. درجه حرارت بهینه برای فعالیت آنزیم آلفا-گلوکوزیداز در لوله گوارش و همولنف به ترتیب 35 و 45 درجه سانتی گراد و برای آنزیم بتا-گلوکوزیداز لوله گوارش، غدد بزاقی و همولنف به ترتیب 45، 35 و 35 درجه سانتی گراد محاسبه شد. ph بهینه برای فعالیت پروتئاز لوله گوارش11 و دمای بهینه 45 درجه سانتی گراد بدست آمد. نتایج نشان داد که با افزایش سن لاروی میزان فعالیت ویژه آنزیمهای آلفا-آمیلاز، گلوکوزیدازها، گالاکتوزیدازها و پروتئازها افزایش می یابد. همچنین میزان فعالیت ویژه آنزیم های گوارشی در لوله گوارش نسبت به غدد بزاقی و همولنف نیز بیشتر بود. میزان مهارکنندگی بازدارنده های pmsf، tpck، tlck، edta ، یدو استات و یدو استامید روی فعالیت آنزیم پروتئاز به ترتیب 4/44، 4/9، 3/68، 36، 18 و 22 درصد محاسبه شد. نتایج زایموگرام روی ژل نشان داد که آنزیم های آلفا و بتا گلوکوزیداز در لوله گوارش پروانه سفید اشجار هر کدام دارای دو ایزوفرم و آنزیم پروتئاز نیز 3 ایزوفرم را نشان داد. در این تحقیق سمیت باکتری باسیلوس تورینزینسیس روی لاروهای سن 3 و 4 پروانه سفید اشجار مورد بررسی قرار گرفت. همچنین اثرات زیر کشندگی غلظت های ld25، ld50 و ld75 روی فعالیت آنزیم های گوارشی (آلفا-آمیلاز، آلفا- و بتا- گلوکوزیداز و گالاکتوزیداز، پروتئاز) و فنول اکسیداز بررسی شد. نتایج نشان داد که ld50ی حشره کش bt روی لاروهای سن 3 و 4 پروانه ابریشم باف پاییزی به ترتیب 2/3 و 4/7 (میلی گرم ماده فرموله شده بر میلی لیتر) بدست آمد. فعالیت آنزیم های گوارشی در لاروهای تیمار شده با غلظت های زیر کشنده باکتری باسیلوس تورینژینسیس نسبت به شاهد کاهش پیدا کرد. فعالیت آنزیم فنول اکسیداز پس از 48 و 72 ساعت در لاروهای تیمار شده با غلظت ld25 نسبت به شاهد افزایش یافت.